細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)方法
細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)方法
1. 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
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應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。
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在無菌臺內(nèi)將完全培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi)，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
2. 傳代:
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貼壁細(xì)胞:
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懸浮細(xì)胞:
對于貼壁細(xì)胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強(qiáng)度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進(jìn)行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細(xì)胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細(xì)胞全部脫落，加入2-3ml完全培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細(xì)胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?
一般傳代可直接將細(xì)胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
3. 凍存
將貼壁細(xì)胞消化后離心收集，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以完全培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。
